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norae:biologicus:note_technique_pour_culture_anaerobies_facultative

Note pour culture en pétri avec anaérobie facultative

Est anaérobie facultatif un organisme capable de se développer en présence (milieu aérobie) ou en l'absence d'oxygène moléculaire (O2, milieu anaérobie) en anaérobiose.
Par exemple, pour l'azote, les bactéries du cycle de l'azote comme les Pseudomonas sont de nature anaérobie facultative. Chaque bactérie fonctionne alors comme une bactérie anaérobie facultative, en anaérobiose facultative.

L'équipement

  • Bouteille de de 2L, vide et propre
  • Ballon en latex avec un col suffisamment large pour s'étendre sur la bouche de la bouteille et suffisamment élastique pour enserrer le goulot
  • Entonnoir, cuillère ou petite spatule de laboratoire
  • Vinaigre
  • Bicarbonate de soude
  • Sac à fermeture zip ou sacs de congélation de la taille minimum d'une demie feuille A4
  • Clam circulaire ou collier de serrage
  • Boîte de Pétri, déjà chargée d'agar et inoculée avec votre échantillon
  • Incubateur

Comment faire

  1. Versez entre 250 et 500 ml de vinaigre dans la bouteille.
  2. Remplissez le ballon en latex à moitié de bicarbonate de soude. Vous pouvez faire en enfonçant le col de l'entonnoir dans le ballon et en versant du bicarbonate de soude (vous devrez peut-être l'enfoncer avec un stylo ou (car il est agglutiné), ou de verser du bicarbonate de soude avec la cuillère/spatule et en la poussant dans le ballon (attention au risque de versement en dehors du réservoir).
  3. Étendez le col du ballon sur le goulot de la bouteille de manière à ce que vous obteniez une bonne étanchéité.
  4. Tenez le corps du ballon à la verticale puis renverser tout le bicarbonate de soude dans la bouteille. Le vinaigre et le bicarbonate de soude réagissent le ballon se remplira de CO2
  5. Fixez le col du ballon avec le serre-joint ou un clamp, aussi bas que possible de l'embouchure du ballon pour un verrouillage sécruisé. Laissez le la bouteille pour l'instant.
  6. Mettez votre boîte de pétri dans le sachet ziplock, à l'envers, et mettez le tout sur une surface plane. Aplatissez le sachet autant que possible pour le vide de son air ambiant.
  7. Fermez le sachet à l'exception d'une petite ouverture, juste large assez pour admettre le col du ballon.
  8. Détacher le ballon gonflé de la bouteille, en prenant soin de le garder bien serrée pour conserver le CO2
  9. Insérez l'embouchure du ballon aussi loin que possible dans le sachet ziplock.
  10. Retirez soigneusement la pince du ballon. Pas totalement ni brusquement pour éviter un un gros coup de souffle. Tenez le ballon dans une main et gardez votre l'autre main sur le sachet pour que le gaz ne les sépare pas.
  11. Lorsque le sachet est complètement gonflé, faites glisser rapidement le ballon et fermer la petite ouverture du sachet. Assurez-vous que le sachet est entièrement scellée.
  12. Veillez à transporter le sachet par en dessous afin que la boîte pétri ne s'ouvre pas par accident, placez-le dans votre incubateur.
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norae/biologicus/note_technique_pour_culture_anaerobies_facultative.txt · Dernière modification: 2020/04/20 14:56 par xavcc